23色方案，探索自身免疫性疾病的潜在治疗靶标

淋巴细胞表面的抑制性受体（我们也通常称为免疫检查点，如我们比较熟悉的PD-1, CTLA-4等），被认为是癌症治疗的有力靶点。而在自身免疫性疾病中，尽管很多研究证实，这些受体也直接参与致病过程，但目前，还没有靶点被批准用于自身免疫性疾病的治疗。了解这些受体在疾病中的表达模式对靶向药物的探索与设计至关重要。

基于Cytek Aurora光谱流式细胞仪，该研究设计了3个23色的T细胞方案和一个B细胞方案，用于检测健康个体、多发性硬化症（MS）和系统性狼疮（SLE）患者的外周血中T和B淋巴细胞的免疫调节表面受体表达情况。方案中所包含的细胞系别标记和免疫调节（激活与抑制）受体情况如下图所示。对设门感兴趣的用户可以点击阅读我们的另一篇文章，23色自身免疫性疾病方案T和B细胞亚群的设门。

研究选择Cytek Aurora光谱流式细胞仪（4激光器配置48检测通道）完成了主要的实验检测。Aurora拥有独有的全光谱检测和分析技术，48个检测器帮助收集来自整个发射光谱范围内的荧光信号，大大增加了染料的选择范围，可以选择绝大多数市售的荧光染料，对于在传统流式细胞仪上不能同时使用的染料，如APC和Alexa Fluor 647，也可以同时使用。

研究对检测数据进行进一步分析，发现了很多有意思的结果，比如对于T细胞不同亚群的研究发现，几种受体在不同细胞亚群中的表达存在差异，如抑制性受体PD-1，BTLA，CTLA-4，CD5，和激活性受体CD28，CD38，OX40，及CD2等，这些受体在辅助性T细胞-Th 1和/或Th17细胞上的表达，要明显高于在调节性T细胞 (Treg)（下图-A, B），通过ADCC实验证明这些差异是与功能相关的(图3-C)。同样，研究也发现在B细胞不同亚群上，所检测的激活或抑制性表面受体也存在表达差异。这些细胞亚群特异性的免疫调节受体差异表达，为探索自身免疫性疾病的治疗靶标提供了更多依据。

无偏多参数分析显示，在MS和SLE中，分别出现CD8+ 效应记忆细胞亚群（CD8⁺ CD45RA^-CD62L^-）和未转换的记忆B细胞亚群（CD27⁺ IgD^low IgM⁺⁺）的减少（下图），这些改变，要么与有抗原记忆的T细胞从淋巴结迁移至外周血有关，要么与血浆中升高的抗核抗体、dsDNA抗体等有关。

总体而言，该研究利用4个20色以上的流式方案对外周血PBMCs进行检测，详细描述了免疫调节细胞表面受体在T细胞和B细胞亚群上的表达差异。这些差异，使相关的激活和抑制受体成为了自身免疫性疾病治疗的潜在理想靶标。比如以BTLA和CD5为例，研究证明可以利用受体的差异表达，选择性的耗竭Th1和Th17细胞，同时保留Treg细胞。从该研究中我们也发现了基于光谱流式的多色检测方案的优势，仅需简单的设计，即可获得丰富的检测信息。

 

*参考文献：

Murphy K A, Bhamidipati K, Rubin S J, et al. Immunomodulatory receptors are differentially expressed in B and T cell subsets relevant to autoimmune disease. [J]. Clinical Immunology, 2019.
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