看不见就不存在吗？---巧用自发荧光提取，扭转实验结果！

878 人阅读发布时间：2021-05-11 15:01

2021年3月，Cytek邀请来自墨尔本大学流式细胞平台管理者Alexis Perez Gonzalez 博士，为众多光谱流式用户呈现了一场题为‘Just because you don’t see it doesn’t mean it isn’t there’ 的精彩网络讲座。Alexis博士拥有近20年的丰富的流式经验，在这期讲座中，他通过实际应用案例，详细介绍了如何利用自发荧光提取，提高流式实验中弱表达信号的检测分辨率，最终成功获得阳性实验结果的。

精彩要点

为什么选择Cytek Aurora

墨尔本大学流式细胞平台拥有超过28台流式细胞仪器，2018年起，平台陆续引进3台Cytek Aurora全光谱流式细胞仪。通过Alexis博士的介绍，我们将了解研究者为何在近年的采购中选择Aurora，并跟随研究者一起，通过讲座中的实验，探索Aurora的灵敏度、自发荧光提取等特性。

检测挑战：

弱表达tdTomato reporter的组织和亚群分布

研究者用tdTomato reporter标记了一个缺乏特性的固有免疫标记X，但在检测时遇到了许多挑战，研究者几乎检测不到tdTomato，即使检测到，分辨率也很差。于是，研究者开始重新审视和评估实验方案及检测方法。

发现tdTomato：方案设计

根据下图的流程，研究者设计了2个12色的方案，由于希望评估不同仪器的数据表现，还特意牺牲了光谱流式强大的解析能力，以使方案可兼顾偿传统流式。

Aurora的自发荧光提取

研究者着重评价了Cytek Aurora的自发荧光提取对数据表现的影响。通过自发荧光提取前后的比较，研究者指出，Aurora的自发荧光提取功能不仅可以增加数据的动态范围，同时可以提高对荧光素的检测灵敏度。

利用Aurora检测tdTomato

初始的实验让研究者意识到，所检测的靶细胞应该具有高自发荧光，才致使tdTomato标记的信号不能被成功分辨出。研究者利用Cytek Aurora，重新寻找辨别样本中的高自发荧光细胞亚群（可能的靶细胞），最终鉴定出肺泡巨噬细胞样和淋巴细胞样亚群，并将这俩类细胞的自发荧光提取出来作为一种新的荧光信号纳入后续的数据解析。