全光谱流式高参数数据如何保证高质量？--- 颜色数量与数据质量的平衡艺术

Cytek^®全光谱流式技术及产品自发布以来，因其超多色的检测能力和卓越的灵敏度等特性，深受广大流式用户的肯定与支持，并逐步掀起了业内各厂家布局全光谱流式赛道的热潮。随着全光谱流式的逐渐普及，越来越多的用户开启了高参数流式之旅，而产出高质量的多色流式数据，也变成了更为广泛的需求……如果说追求颜色数量与数据质量的平衡是一场精彩的艺术演绎，那么，拥有一台值得信赖的全光谱流式细胞仪只是开始，强大的技术服务与支持将是最佳助力。

作为实验人员，如何搭建高质量的多参数方案呢？OMIP-069就是值得参考的指南性的文章，建议全光谱流式的使用人员阅读这篇文章的补充材料，详实的材料一步步地描述了方案设计和优化的思路和技巧。OMIP-069是Cytek研发与技术团队的经典佳作，也体现了Cytek在全光谱流式领域强大的技术力量。

当检测颜色不多时，例如只有2个颜色，实验普遍都能得到清晰分群的结果。当方案升级到40色甚至超过40色时，是否意味着此时就需要牺牲数据的分辨率呢？答案当然是否定的，而接下来分享的45色方案，生动地阐释了颜色数量和数据质量的平衡艺术。

45色方案的设计起点基于40色经典方案，第一步考虑到部分试剂的可用性及数据表现的可优化性，对原方案的部分试剂进行了替换。第二步扩展方案，在人单个核细胞的基础上，重点聚焦于记忆T细胞的免疫表型进行深入剖析。横向对比两个方案的数据表现，45色方案获得了相当甚至于更优的分辨率。

45色方案设计借助Cytek^® Cloud云端配色工具，一站式集成了全光谱流式方案设计到数据采集的在线工具，Panel Builder内置预先设计的多色方案和OMIP已发表方案，用户可以一键检索并以此为基础进行修改，也可以自主DIY设计方案；Experiment Builder将多色方案无缝传递至SpectroFlo^®软件，简化了上机流程。

全光谱流式捕获荧光素完整光谱特征，相较于传统流式，能够兼容发射光谱高度相似的荧光素。45色方案中作者测试了一系列相似的荧光组合对，均能被清晰地区分，FMO对照也进一步证明了相似染料并未对多色结果产生影响。

聚焦于记忆T细胞，细分出众多细胞亚群，这个方案的亮点之一在于颜色多，但是对于低比例细胞亚群依旧保持卓越的分辨率，不同分化状态的记忆T细胞的功能性指标表达图谱均得到了“高清”呈现。

Cytek^® Aurora™ 分析系统和 Cytek^® Aurora™ CS 分选系统搭载相同的全光谱分析（FSP™）技术，实验方案可在分析分选平台实现无缝衔接，两个系统的二维散点图和降维可视化分析结果均展现出45色深度免疫表型方案的高度可比性。

进一步，在Cytek^® Aurora™ CS 分选仪上，实现了一管样本6路同时分选低比例细胞，并对分选后的细胞进行胞内细胞因子检测，证明了经过分选的6群记忆T细胞亚群的功能性维持正常。