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3激光30+色文章再添新篇！Cytek®全光谱流式仪器与试剂双重加持，精细免疫分型更“如虎添翼”
126 人阅读发布时间：2026-01-15 12:25
Cytek®仪器试剂“并驾齐驱”，
加速高维方案落地
自Cytek®革新性的全光谱分析（FSP®）系统问世，一举突破了传统流式细胞仪的技术瓶颈。发展至今，该系统已成为全球研究人员喜爱的光谱平台，搭载Cytek® FSP®技术平台的文献发表数量一直以断层式优势稳居榜首。其中，5激光配置的Cytek®全光谱流式细胞仪拥有最多的40+色文章见刊成果，充分彰显了行业标杆级的实力；3激光配置的Cytek®全光谱流式细胞仪，对应的经典24色方案被许多研究机构、生物医药企业所采用1，且34色2、31色3的突破性方案也已先后发表。高维方案的落地与普及，一方面离不开Cytek®全光谱流式技术的突破性发展，另一方面，流式荧光染料的推陈出新，也让全光谱流式细胞仪“如虎添翼”，从而释放出全光谱流式细胞仪的无限潜能。
全光谱流式方案亮点
在此前的报道中，艾伯维生物制药公司采用Cytek®全光谱流式细胞仪发表过3激光34色的全光谱流式方案，方案中包含了尚未商业化的荧光染料2；德国柏林夏里特医学院发表过3激光31色的全光谱流式方案，其全部使用商业化的市售荧光染料，但该方案采用新鲜的人外周血标本，并且主要聚焦于单核细胞、NK细胞与T细胞亚群分析3。
这篇来自澳大利亚国立大学约翰·柯廷医学院的研究成果4，团队首次针对冻存的人外周血单个核细胞（PBMCs）开展3激光30色的精细免疫分型检测，围绕T细胞与B细胞亚群均进行了深入细致分析，方案共纳入148名健康供者，旨在推动该研究落地应用于临床辅助诊断、疾病亚型分层与疗效监测等关键场景。30色方案的理论复杂指数仅为19.59（采用Cytek® Cloud云平台一键查看），这得益于Cytek® Cloud云平台对于方案的预先优化，以及Cytek® cFluor®荧光染料的助力加持。PBMCs样品染色在96孔U底板中完成，之后使用搭载自动进样器的3激光Cytek® Northern Lights™全光谱流式细胞仪进行采集。
图1 – 3激光30色方案具体信息
全光谱流式门控策略
1
圈选单核细胞：FSCmid SSChighCD3-CD19-，采用CD14/CD16依次区分出经典、中间型和非经典单核细胞；
2
圈选淋巴细胞：FSCmid SSClow
1）γδ T细胞：TCRγδ+ CD3+，细分为CD4+、CD8+γδ T细胞以及初始（CD45RA+ CD27+）、效应（CD45RA+ CD27-）、中央记忆（CD45RA- CD27+）、效应记忆（CD45RA- CD27-）γδ T细胞四群；
2）αβ T细胞：TCRγδ- CD3+，其中，CD4+T细胞精细化区分出Treg（调节性T细胞，CD127- CD25+）、cTfr（循环滤泡调节性T细胞，CD45RA- CXCR5+）、Th1（CCR6- CXCR3+）、Th17（CCR6+ CXCR3-）、cTfh（循环滤泡辅助性T细胞，CD45RA- CXCR5+）、活化（CD38+）、耗竭（PD-1+）、TEMRA （终末分化效应记忆T细胞，CD45RA- CCR7- CD27-）、初始（CD45RA+ CCR7+ CD27+）、中央记忆（CD45RA- CCR7+）、效应记忆（CD45RA- CCR7-）、早期效应记忆（CD27+）、早期样/终末效应记忆 （CD27-）T 细胞等亚群；类似地，CD8+T细胞精细化区分出活化、耗竭、TEMRA、初始、中央记忆、效应记忆等细胞亚群；
3）B细胞：CD19+ CD20-细胞中，细分为浆母细胞和浆细胞（CD27+ CD38+）；CD19+ CD20+细胞中，细分为记忆（CD27+ IgD- CD24var CD38-）、IgG记忆（IgG+ IgA-）、IgA记忆（IgG- IgA+）、非转换记忆（CD27+ IgD+）、静息初始（CD27- IgD+ CD21+ IgMvar）、过渡型（CD27- IgD- CD24+ CD38+）、过渡型2/3（CD21+ IgMvar）、非典型（ABCs，CD19+ CD11c+）、轻链亚群等。
图2- 30色方案精细化区分PBMCs中T/B细胞
高质量结果在样本批次间的重现性
为了验证检测结果是否存在批次间差异，研究人员选取健康供者的同一PBMCs样本分批次运行9次，从UMAP降维可视化分析结果可以看出，9次结果分群呈现高度一致的重合，证明30色方案适用于大规模样品的多批次监测跟踪实验。进一步，研究人员纳入了148名健康成人PBMCs标本，针对淋巴与单核细胞亚群开展了精细免疫分型，并统计了亚群比例参考值，为后续临床验证工作提供了有力的统计学依据。
图3 – PBMCs样本重复9次采集，批次间结果一致
总结展望
研究人员基于经典配置的3激光Cytek® Northern Lights™全光谱流式细胞仪设计了30色方案，针对人PBMCs中T/B细胞开展了精细免疫分型检测。值得一提的是，Cytek® Northern Lights™全光谱流式细胞仪具备科研与临床两个版本，为高维方案的临床成果转化提供了更加适配的平台支持；Cytek® Cloud云平台化繁为简，助您一键智能驾驭高维方案的搭配与优化；Cytek®试剂经过全光谱流式细胞仪严格测试，让方案颜色数量与数据质量实现同步跃升。Cytek® cFluor®试剂家族除了文中所采用的cFluor®单色试剂，还包括了Cytek开发的预优化cFluor®一站式试剂盒系列，这些试剂方案配备有完整的样品制备、染色和数据采集方案，以及支持一键式导入的实验模板及分析模板，既能“拿来即用”，也能作为骨架方案拓展更多领域的应用。
图4 - “拿来即用”的一站式Cytek® cFluor®试剂盒
欢迎点击往期推文，回顾德国柏林夏里特医学院发表的3激光31色全光谱流式方案：
Big Panel Theory 系列之--3激光31色精细免疫分型方案
参考文献
1Ma, W. et al. Dynamic evaluation of blood immune cells predictive of response to immune checkpoint inhibitors in NSCLC by multicolor spectrum flow cytometry. Front Immunol 14, 1206631, doi:10.3389/fimmu.2023.1206631 (2023).
2Seong, Y. et al. Novel PE and APC tandems: Additional near-infrared fluorochromes for use in spectral flow cytometry. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology 101, 835-845, doi:10.1002/cyto.a.24537 (2022).
3Hammerich, L. et al. Resolving 31 colors on a standard 3-laser full spectrum flow cytometer for immune monitoring of human blood samples. Cytometry. Part B, Clinical cytometry 104, 367-373, doi:10.1002/cyto.b.22126 (2023).
4Davies, A. R. et al. Advanced immunophenotyping of lymphocyte and monocyte subsets in healthy Australian adults using a novel spectral flow cytometry panel. J Frontiers in Immunology 16, 1577206 (2025).