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49色全光谱流式方案！Cytek用户发表人外周血全谱系免疫表型与功能可视化图谱
7 人阅读发布时间：2026-06-30 20:52
Cytek® FSP®技术引领全光谱流式潮流，
创下多色发展史多项“第一”
在全光谱流式领域，基于Cytek®专利全光谱分析（FSP®）技术的发表文献数量一直稳居榜首。Cytek® FSP®技术引领着全光谱流式发展浪潮，缔造了多项行业首创成果，尤其在多色领域。
2020年，Cytek在流式方法学权威杂志Cytometry Part A发表了第一篇全光谱流式细胞仪40色文章——OMIP-069，这是全光谱流式领域上具有里程碑式意义的成果1；由于其对行业的深远影响，该文章荣获当年年度最佳文章奖(Cytometry Part A 授予)；
2024年，Cytek首次基于其全光谱分析分选流式双平台，发表了无缝衔接高维方案的45色文章2；
2025年，Cytek用户发表全球46色小鼠淋系和髓系胞内外方案3；
......
2026年，由用户独立开发的人外周血49色方案正式见刊4；
上述成果不仅彰显了Cytek® FSP®技术在全光谱流式领域的地位，同时，用最直接的证据，证明Cytek全光谱流式细胞仪及配套资源是前沿科学研究的强有力工具，帮助科学研究者们轻松搞定高维实验，化繁为简，直达清晰！
图1 – 首篇用户独立发表的人冻存外周血49色文章
Cytek®全光谱流式细胞术方案
美国俄勒冈健康与科学大学奈特癌症研究所的研究团队基于5激光Cytek® Aurora™全光谱流式细胞仪，设计了针对人冻存血样白细胞层的49色全景式免疫表型及功能性的胞内外检测方案，方案中纳入了淋系与髓系表型、活化、增殖及耗竭状态等一系列指标，从冻存细胞复苏、染色、上机采集到数据分析，给出了细致详尽的操作指南。
图2 - 人冻存外周血49色全光谱流式方案
（采用Cytek® Cloud云平台绘制方案矩阵图）
全光谱流式实验流程
步骤1
配备缓冲液。提前准备流式染色缓冲液、清洗液、固定液、破膜液等；
步骤2
制备对照抗体组与多标抗体组。在96孔U底板中进行单标对照抗体滴定、以及FMO对照组、多标组的抗体混合；
步骤3
制备单细胞悬液。从人的外周血中分离白细胞层，冻存后可以长期保存。在流式实验前进行细胞复苏，进行细胞计数后，将待测细胞对应重悬于孔板中；
步骤4
活性染料染色。向对应细胞孔中加入含Fc受体阻断剂的细胞活性染料，孵育后离心去上清；
步骤5
表面标志物染色。抗体混合液分为两组先后加入，以此确保缓冲液体积占比保持足量，同时保障细胞活性与染色质量；
步骤6
胞内标志物染色。细胞固定破膜处理后，加入胞内抗体混合液孵育；
步骤7
数据采集与分析。依次采集未染对照、单标对照、FMO对照与多标样本，数据解析后进行逻辑圈门及可视化分析。
图3 – 全光谱流式实验流程示意图
全光谱流式数据分析
细胞去除碎片、黏连体与死细胞后，从CD45+免疫细胞中圈选B、T、NK、单核、粒、树突状细胞等主要谱系与功能亚群，免疫复杂性图谱可以直观地呈现所检测的主要细胞亚群的分布特征（图4），降维可视化分析针对功能性指标如增殖、细胞毒性、耗竭标志物等平行展开评估（图5）。
图4 – 免疫复杂性图谱直观展示2个样本的主要谱系分布
图5 – 降维可视化分析展现功能性指标表达
总结展望
作为用户独立发表的全球首篇人的49色胞内外方案的文章，冻存外周血样本的可及性与易保存性，有助于该方案得以普及性开展，同时，借助于Cytek® Aurora™全光谱流式细胞仪进行高维方案开发与优化，对于后续拓展应用于多样化的临床样本，开展多中心平行纵向研究，提供了兼具标准化与一致性的可靠平台支撑。
参考文献
1Park, L. M., Lannigan, J. & Jaimes, M. C. OMIP-069: Forty-Color Full Spectrum Flow Cytometry Panel for Deep Immunophenotyping of Major Cell Subsets in Human Peripheral Blood. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology 97, 1044-1051, doi:10.1002/cyto.a.24213 (2020).
2Park, L. M., Lannigan, J., Low, Q., Jaimes, M. C. & Bonilla, D. L. OMIP-109: 45-color full spectrum flow cytometry panel for deep immunophenotyping of the major lineages present in human peripheral blood mononuclear cells with emphasis on the T cell memory compartment. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology, doi:10.1002/cyto.a.24900 (2024).
3Dhital, R. et al. Ruxolitinib and oHSV combination therapy increases CD4 T cell activity and germinal center B cell populations in murine sarcoma. Mol Ther Oncol 33, 200929, doi:10.1016/j.omton.2024.200929 (2025).
4Wright, A. P., Lindaman, M., Huang, E., Coussens, L. M. & Poissonnier, A. A high-parameter spectral cytometry protocol for immune subset and functional characterization of cryopreserved human blood with 49 biomarkers. STAR protocols 7, 104333, doi:10.1016/j.xpro.2025.104333 (2026).