自然杀伤细胞（Natural Killer, NK）是先天淋巴细胞的亚群之一，但缺少抗原特异性。NK细胞的效应功能和靶细胞的识别是由对NK细胞表面受体的激活和抑制来平衡调节的，这些表面受体可以区分“自身”抗原、“改变的自身”抗原和“缺失的或非自身”抗原，因此，在消灭异常细胞的同时，可以避免攻击正常的细胞。^1-3（图1）

 

图1 – NK细胞识别自身/缺失的/非自身抗原细胞示意图

 

NK细胞在抗肿瘤和抗病毒反应中起关键作用^4-6。目前，各种转化研究和临床试验正在利用NK细胞独特的信号通路及其强大的抗肿瘤活性，通过多种手段比如CAR-NK细胞，来治疗血液和实体肿瘤。⁶

 

研究显示，NK细胞表达的NK细胞受体和其他标记物种类繁多，因此，高参数流式细胞术对于全面的NK细胞表型分析是很有必要的。考虑到越来越多的NK细胞研究需求，Cytek推出了一款 16色 （18标记）NK 细胞免疫分型试剂，该试剂可在3激光以上配置的Cytek^®全光谱流式细胞分析系统上使用，仅需一管样本，研究者即可方便快捷的对人NK细胞免疫表型进行全面深入的分析。（图2）

 

图2- Cytek^® 16色人NK细胞免疫分型试剂

 

Cytek^® 16色人NK细胞免疫分型方案可识别和表征三种主要的人类NK细胞亚群：早期NK细胞（CD16- CD56bright），成熟NK细胞（CD16+CD56dim）和晚期NK细胞（CD16+CD56-），并支持对这三种NK细胞亚群的成熟和激活状态、迁移潜力、以及NK细胞表面的激活和抑制受体的表达进行分析。此外，该方案还可分析更多NK亚群，如CD226-CD56dim NK细胞，及CD57+CD56dimCD16+ NK细胞^7-11。（图3）

 

图3- 不同状态下的NK细胞示意图

 

Cytek^® 16色 NK 细胞免疫分型方案是一款预优化的试剂组合产品，避免了耗时的、耗费劳动力的、且昂贵的方案设计与优化。该方案详细的试剂组成请参考下表1。同时，方案经过系列测试，证实可以很好兼容人外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs）样本和EDTA采集管收集的血液样本。

 

表1：Cytek® 16色NK细胞免疫分型方案（P/N R7-40011）的组成。

 

方案可添加ViaDye™ Red Fixable Viability Dye Kit (P/N R7-60008)作为死活染料。

 

Cytek^® 16色 NK 细胞免疫分型方案识别NK细胞及其激活状态的数据分析设门策略如下图4所示，依次进行单细胞门和非红细胞（non-RBC）设门后，通过进行谱系（CD14、CD19、CD123）阴性、CD3-、淋巴细胞、及HLA-DR-CD127- 系列设门，识别出NK细胞。利用CD56和CD16绘制二维点图，以确定三种主要的NK细胞亚群：早期NK细胞（CD16- CD56bright），成熟NK细胞（CD16+CD56dim）和晚期NK细胞（CD16+CD56-）。在代表总NK细胞群的密度图中，显示了各个NK细胞标记 vs. CD56，以及CD159a vs. CD159c 的表达情况。（图4）

 

图4- 使用Cytek^®16色NK细胞免疫分型方案数据分析设门策略。

 

数据来自于EDTA管收集的健康供者的全血样本。

Cytek 还提供以下工具来进一步优化您的实验室工作流程，提高工作效率：

     •完整的样品制备、染色和获取操作流程

     •实验及分析模板

 

参考文献：

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