Cytek®分析分选双平台45色文章见刊！持续引领全光谱流式高质量数据标杆

近期，Cytek高维流式方案的又一力作--45色深度免疫分型方案在Cytometry Part A杂志上正式发表，这是Cytek作为全光谱流式高质量数据引领者的又一里程碑事件。

图1 – Cytek^®全光谱流式细胞仪45色文章见刊¹

高维流式方案中，相对于Broad panel而言，更具有挑战性的是Deep panel，即需要针对某群细胞进行精细化分型。这篇45色文章就是如此，在全景式描绘人外周血单个核细胞免疫图谱的同时，进一步深入挖掘了记忆T细胞的免疫表型。除此之外，高维方案在不同平台之间的结果重现，也是流式细胞仪中的另一个难度系数很高的挑战。这篇45色文章不仅在不同的全光谱流式分析平台间进行高维方案平移，还在全光谱分析分选双平台间也实现了高质量数据的重现，并且成功地完成了稀有细胞的6路分选实验。

2020年，流式方法学权威杂志Cytometry Part A中的OMIP（Optimized Multicolor Immunofluorescence Panels）系列，发表了第一篇全光谱流式细胞仪超多色文章--OMIP-069²，40色全光谱流式高维免疫分析方案，这是全光谱流式领域上具有里程碑式意义的成果。2022年，这篇文章荣获Cytometry Part A年度最佳文章奖，奠定了这篇文章作为高质量数据典型代表的公认地位。2024年，45色文章的问世，在全光谱分析和分选流式双平台实现高维方案平移复刻，更是开拓了全光谱流式应用更加多元化的角度和思路。

图2 - 2020年OMIP-069里程碑式意义的40色文章见刊³

截至目前，OMIP系列中全光谱流式细胞仪发表的文献量，Cytek当之无愧地稳居首位。Cytek发表的OMIP系列文章的研究对象囊括了人PBMC精细免疫分型、人单核细胞、人γδT细胞细致分群、人血小板综合表型分析、小鼠先天性和获得性淋巴细胞、小鼠代谢相关表型检测，以及猪-狒狒这类相对少见的种属。设计的实验方案从3激光16色到5激光45色，从分析到分选的应用均囊括其中。

图3 - Cytek^®全光谱流式细胞仪在OMIP上发表的文章示例^2,4

除OMIP文章外，还有许多利用Cytek全光谱流式系统在各个领域的多色应用方案发表在不同的杂志期刊，感兴趣的用户可访问Cytek微信公众号菜单栏-技术分享，获取更多信息。

基于OMIP-069的经典40色方案，作者保留了原方案37个指标，优化了其中部分荧光素，并且加入了8个新的指标。45色方案精细描绘了人外周血免疫细胞的全景式图谱，横向评估了T、B、NK、γδT、NKT、单核、嗜碱性粒、先天淋巴样（ILCs）、树突状（DCs）等细胞，纵向剖析了CD4+ 和CD8+ T细胞活化、耗竭、记忆和分化等指标，重点聚焦于记忆T细胞的深入分析。采用Cytek^® Cloud 平台进行方案搭配，简化了高维方案的配色流程。值得一提的是，Cytek^® Cloud平台中内置了已发表的所有OMIP方案，可以一键检索并作为方案设计的起点，同时，全新的AI智能化配色功能，让用户在短短几分钟时间内就能全自动生成高维流式方案。

图4 – 45色全光谱流式方案信息表

Cytek^® Aurora™分析型流式细胞仪和Aurora™ CS分选型流式细胞仪均搭载专利的全光谱分析（Full Spectrum Profiling™, FSP™）技术，高维方案可以在双平台间“复制粘贴”，以高度一致的分辨率呈现高质量的结果。这是目前第一篇也是一一篇来自同一厂家的全光谱分析分选不同流式平台间，实现高维方案无缝衔接的文章。同一样品在3台Aurora™分析型流式细胞仪和1台Aurora™ CS分选型流式细胞仪上平行获取，从降维可视化分析结果来看，4台仪器呈现的结果完美的重叠，为实现多中心标准化打造了一体化的平台，也大大简化了分选实验的操作流程。

图6 – 全光谱流式分析和分选平台无缝衔接呈现高质量数据

进一步，作者采用Aurora™ CS全光谱分选型流式细胞仪，对于不同分化状态的CD4+ 记忆T细胞亚群同时进行6路分选，分选后的细胞经过培养，功能性维持很好，呈现出6种细胞不同的细胞因子表达趋势，说明6种细胞可能在免疫系统中“各司其职”，扮演着不同的角色。

图7 – 6路分选细胞并进行功能性验证

参考文献

1Park, L. M., Lannigan, J., Low, Q., Jaimes, M. C. & Bonilla, D. L. OMIP-109: 45-color full spectrum flow cytometry panel for deep immunophenotyping of the major lineages present in human peripheral blood mononuclear cells with emphasis on the T cell memory compartment. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology, doi:10.1002/cyto.a.24900 (2024).

2Park, L. M., Lannigan, J. & Jaimes, M. C. OMIP-069: Forty-Color Full Spectrum Flow Cytometry Panel for Deep Immunophenotyping of Major Cell Subsets in Human Peripheral Blood. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology 97, 1044-1051, doi:10.1002/cyto.a.24213 (2020).

3Mahnke, Y. & Tárnok, A. Celebrating 10 Years of OMIPs. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology 97, 1017-1018, doi:10.1002/cyto.a.24232 (2020).

4Kare, A. J. et al. OMIP-095: 40-Color spectral flow cytometry delineates all major leukocyte populations in murine lymphoid tissues. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology 103, 839-850, doi:10.1002/cyto.a.24788 (2023).