全光谱流式持续发力！清华大学多篇高分文章深度聚焦免疫学前沿进展

机体受外源抗原免疫或病毒感染后产生长效免疫应答，这一过程与长寿浆细胞（LLPCs）息息相关。长寿浆细胞主要存在骨髓中，由于数量很少，目前研究人员对其细胞表型知之甚少。本研究联合了全光谱流式与单细胞转录组测序平台，发现IgG和IgM LLPCs具有EpCAMʰⁱCXCR3^-表型，IgA LLPCs具有Ly6AʰⁱTigit^-表型，其中IgG与一部分IgA LLPCs可被外源抗原免疫或病毒感染诱导，经历生发中心内的亲和力成熟过程；而EpCAMʰⁱCXCR3^- IgM LLPCs的生成并不依赖于生发中心反应，具备识别来自自身与肠道菌群抗原的固有免疫细胞的特征。研究人员采用Cytek^® Aurora™全光谱分析型流式细胞仪检测经过外源抗原免疫或病毒感染小鼠的脾脏或骨髓细胞，尽管LLPCs细胞含量低，依旧逃不过Cytek Aurora全光谱分析型流式细胞仪的 “火眼金睛”，以卓越的灵敏度和分辨率成功区分出异质性的LLPCs，这项研究为深入剖析长效抗体免疫反应机制提供了重要的理论基础。

当受到抗原再次激活时，记忆B细胞（MBCs）分化为浆细胞（PCs）还是生发中心（GCs），与转录因子BLIMP1-BACH2的相对表达水平有着密不可分的关系。BLIMP1丰度升高时，记忆B细胞更易于分化为浆细胞；BACH2丰度升高时，记忆B细胞则更容易分化为生发中心，改变BLIMP1-BACH2的平衡可以决定记忆B细胞究竟何去何从。研究人员基于Cytek Aurora全光谱分析型流式细胞仪将B细胞区分为PCs (B220^loCD13⁺)，GCs (B220⁺CD138^-FAS⁺GL7⁺CD38^-)，抗原特异的MBCs (B220⁺CD138^-GL7^-IgD^-CD38⁺ NIP-binding)，naive B 细胞 (B220⁺CD138^-GL7^-IgD⁺)，对于极低比例的细胞也能“高清”识别，还同时检测了荧光蛋白EYFP与RFP的表达，全光谱流式方案展现了高度的兼容性和极大的可扩展性。

记忆B细胞（MBCs）在疫苗接种后产生的体液免疫反应中扮演着至关重要的角色，当机体受到外源抗原再次刺激时，记忆B细胞是否能够高效应答，对于评估机体的长效免疫反应起着决定性作用。本研究首次发现转录因子ZFP318通过介导线粒体基因的表达，对MBCs保持再次应答能力起着关键性的调控作用，这一发现也为改善疫苗设计提供了全新的思路。研究人员使用Cytek Aurora全光谱分析型流式细胞仪对于B细胞进行精细化分群，采用线粒体指示剂MitoSpy™ NIR DiIC1染色MBCs，发现ZFP318缺失会引起线粒体膜电位下降，再次遇到抗原时MBCs会由于无法抵抗氧化应激而死亡，表现为caspase 3活化程度增加，进而阻碍了MBCs再次应答的功能性。Cytek Aurora全光谱分析型流式细胞仪能够轻松兼容精细免疫分型实验，以及细胞功能性检测如线粒体膜电位、细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期、细胞活性评估等实验。