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183 人阅读发布时间:2025-03-17 15:53
背景介绍
但是MDS的诊断是非常具有挑战性的,对某些症状不明显的病人来说,确诊MDS将变得异常困难。这种情况下,往往需病理专家用眼睛来仔细观察病人骨髓涂片,这可能会使诊断结果因人为因素而出现差异性。因此,急需一种准确的、可标准化且可重复的诊断MDS的方法。

图1:MDS异常增生的表现
Amnis®成像流式助力MDS诊断
Amnis®成像流式细胞术是对现有的仅依靠于人工的形态学诊断的有力补充,无需预先富集细胞,通过荧光标记,可仅分析具有相关免疫表型的细胞。并且可在较短时间内获取和统计大量细胞的信息,因此可高效和准确地进行实验分析,还可实现自动化和标准化,并能极大降低人为操作引起的差异。

图2:Amnis®成像流式可作为现有MDS诊断方法的有力补充
Amnis®成像流式细胞仪
Cytek® Amnis® ImageStream®X Mk II成像流式细胞仪结合了成像和流式两种技术的优点,既可快速捕获每一个细胞的图像,也能获取具有统计学意义的数据,并且流式图上每一个点都可以和细胞图像一一对应(图3)。

图3:眼见为实,Amnis®的流式数据和图像数据一一对应
成像流式可支持明场,SSC以及多达10个荧光通道的成像。并且还可以配置20X/40X /60X的物镜组,可对不同大小的细胞成像,并可以提供更高的分辨率。

图4:Cytek® Amnis® ImageStream®X Mk II
成像流式细胞仪光学设置图
Amnis®系统使用IDEAS®软件进行分析,在该软件中使用mask来定义细胞的特定区域。例如定义整个细胞的区域,细胞膜的区域,细胞核的区域等(图5)。此外,Mask还可结合形状、尺寸、位置、信号强度和纹理等细胞的特征参数(图6),对细胞进行量化统计分析。

图5:Mask定义细胞特定区域

图6:IDEAS®软件中的特征参数类型
在数据分析上,除了标配的IDEAS®软件以外,在IDEAS®软件中可以配置Machine Learning模块用于深度分析,此外还可以配置Amnis® AI软件,以实现智能化的自动分析。
Machine learning助力识别不同细胞类型
接着通过类似的步骤,使用Machine Learning进行计算,从FP群体中可区分出真正的双核红细胞和黏连体。识别出双核红细胞后,可对其进行计数,用以帮助病理学家确诊MDS。

图7:使用Machine Learning进行数据分析
强大的Amnis® AI软件用于辅助检测MDS
Amnis® AI软件的数据分析流程十分简单,利用从Amnis® IDEAS®上获取的图像数据,对卷积神经网络模型(CNN)进行训练,使其准确区分图片集中的TP,FP以及黏连体(图8)。

图8:Amnis® AI软件数据分析流程
在对CNN的具体训练过程中(图9),有如下步骤:1)向Amnis® AI软件中导入从7个MDS病人上获取的数据集;2)给明场,CD235a和DNA分配合适的图像通道;3)导入785个经IDEAS®软件分析的潜在双核细胞,并且手动标记三种“ground truth”细胞-双核红细胞,黏连体和不规则核型的单核细胞;4)利用软件中聚类算法(基于形态学的类似程度,给相似细胞分组)或者预测算法(对未分类的细胞,预测最合适的模型分类),来快速获取更多准确分类的“ground truth”细胞;5)对CNN算法模型进行训练;6)Amnis® AI软件给出CNN算法分类结果的准确度,对其进行评估,发现利用Amnis® AI分类的准确度高达94%(图10)。

图9:对CNN算法模型进行训练

图10:利用Amnis® AI分类的准确度
Amnis® AI软件助力MDS诊断的效果极/佳
1
大部分手动分类的细胞也可被Amnis® AI软件或Machine Learning功能分析和识别出来;
2
Amnis® AI软件的分析结果中找出了更大比例的真正的双核红细胞;
3
Amnis® AI软件的分析结果中,假阴性的双核红细胞占比很低。
使用Amnis® AI软件进行数据分析的优势
1
准确的分析结果:结合强大的CNN算法和随机森林算法,可实现自动化分析,并且实现准确的分析结果;
2
分析结果高度一致:显著提高分析结果的一致性和可重复性,极大减少了不同实验者分析的主观性,也可避免不同时间点分析的差异性;
3
节省大量宝贵时间:只需简单的标记少量细胞样本,系统即可生成分类模型,可扩展分析海量数据,可避免重复性工作,并极大程度减少手动分类细胞的工作量,节约大量时间;
4
应用场景广泛:可在多个应用中使用Amnis® AI软件进行分析,极大助力高水平文献的发表;
5
操作简单:Amnis® AI界面直观,分析操作流程也十分简单,即使是没有计算机专业背景的人也能很快上手;
6
可视化验证分析结果:分析结果为可视化交互式图库,用户可直观验证分类的准确性;
7
极大的临床应用价值:Amnis® AI拥有极大的临床应用价值,可增强Amnis®成像流式细胞仪在日常诊断分析上的应用。
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参考文献:
Rosenberg CA, Bill M, Rodrigues MA, Hauerslev M, Kerndrup GB, Hokland P, Ludvigsen M. Exploring dyserythropoiesis in patients with myelodysplastic syndrome by imaging flow cytometry and machine-learning assisted morphometrics. Cytometry B Clin Cytom. 2021 Sep;100(5):554-567. doi: 10.1002/cyto.b.21975.
Rosenberg CA, Rodrigues MA, Bill M, Ludvigsen M. Comparative analysis of feature-based ML and CNN for binucleated erythroblast quantification in myelodysplastic syndrome patients using imaging flow cytometry data. Sci Rep. 2024 Apr 23;14(1):9349. doi: 10.1038/s41598-024-59875-x. Erratum in: Sci Rep. 2024 Jun 6;14(1):13024. doi: 10.1038/s41598-024-63712-6.