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173 人阅读发布时间:2025-05-13 13:50
在对动物-藻类共生关系的研究中,计数实验对于解析此类共生关系的建立或破裂来说十分关键,因此准确捕获藻细胞数量的微小变化对此研究过程至关重要。而在下面这篇文献中,通过详尽的实验展现了Cytek® Guava® easyCyte™流式细胞仪在藻类检测上的“压倒性”优势。
几种常见的检测藻类的方法:
1 血细胞计数仪
血细胞计数器价格低廉,计数的准确率低,精度低,而且操作过程十分繁琐,耗时长。
2 基于成像的计数方法
可直观看到细胞的状态,但该方法耗材成本较高。且计数的精度和准确性仍需进一步的提升。
3 库尔特计数法
可同时检测颗粒的数量和粒径。但其无法对混合样本中的特定群体进行计数,且所需样本体积较大,浓度较高。
4 流式检测
可计数大量细胞,检测准确度和精度高,可以实现多种应用,并且自动化的仪器可以节省用户的大量操作时间。但并非所有流式仪器都可实现无beads绝对计数。
几种计数方法在检测藻类浓度上的表现
使用血细胞计数板(H),自行开发的Dinofinder计数软件(D),库尔特计数器(C)以及Guava® easyCyte™流式细胞仪(G)对与藻类共生的CC7品系的海葵样本中的藻类数量进行检测。从图2中可看出血细胞计数仪准确度低,而Dinofinder计数软件计数相比于血细胞计数仪的精确度有进一步的提升,库尔特计数器和easyCyte™流式细胞仪计数结果较为相近。但库尔特计数器检测藻类的所需样本量大,耗时较长,通量低(表1),我们进一步使用easyCyte™流式细胞仪进行检测。

图1:四种计数方法检测藻类浓度表现

表1:四种计数方法特点的总结
Guava® easyCyte™流式细胞仪检测藻类
使用easyCyte™流式细胞仪可以特异性检测藻类的内源性叶绿素荧光,对海葵和藻类共生样本(SYM)进行检测时,可发现流式图上出现一群带红色荧光的细胞,而在无共生藻的海葵样本(APO)中未检出这种群体(图2a)。此外,通过简单的程序去除与藻类共生的珊瑚匀浆中残留的骨骼碎片后,便可在easyCyte™流式细胞仪上直接检测珊瑚样本中的藻类(图2a,2e)。并且该系统还能在较宽的浓度范围内,检测到藻细胞数量的微小变化(图2b,2c)。其还可在对96孔板进行采集时,自动对样本进行混匀,避免了藻类的沉降,使检测结果更加准确和稳定(图2d)

图2:a) 检测不同样品类型和制备方法对流式结果的影响;b) 对未稀释和稀释的匀浆进行分析;c) 连续稀释匀浆液,并将预测值(实线)与测量值进行比较; d) 检测仪器的自动混匀效果;e) 对26°C下保存的两个珊瑚碎片和在33°C下应激3天的两个珊瑚碎片中藻细胞进行计数。
总结
上述结果表明,使用Guava® easyCyte™流式细胞仪,可以准确高效地检测共生系统(海葵、珊瑚等)中藻类的数量,及时反馈共生系统的关键信息,极大地助力对各条件下此共生系统的深入研究,为保护此系统的平衡提供重要指导意义。
Guava® easyCyte™流式细胞仪
用于检测藻类的优势:
微毛细管上样,无beads绝对计数结果准确度高、精度高;
96孔板上样模块,可自动采样和清洗,检测通量高,节省操作者的大量时间;
仪器可对藻类样本进行自动的混匀,减少样本的沉降和堵塞;
可检测较宽的藻细胞浓度范围;
所需藻类细胞的上样体积少;
适用于多类应用,例如检测荧光蛋白的表达等,性价比高;
无鞘液,少废液,处理废液的工作量小。

图3:Guava® easyCyte™流式细胞仪
参考文献:
Krediet CJ, DeNofrio JC, et al. Rapid, Precise, and Accurate Counts of Symbiodinium Cells Using the Guava Flow Cytometer, and a Comparison to Other Methods. PLoS One. 2015