Cytek® Amnis®量化成像流式技术应用--检测细胞外囊泡的全能利器

近年来，细胞外囊泡（Extracellular vesicles, EVs）在疾病诊断、药物递送等领域大放异彩，但检测技术却面临诸多挑战：传统方法如WB、电镜、NTA等通量低、耗时长，而普通流式细胞术检测速度虽快，却难以从背景噪音中准确区分目标，并且不具备成像功能……Cytek^® Amnis^® ImageStream^®X Mk II成像流式细胞仪凭借流式+成像“双Buff”，不仅可对胞外囊泡进行高效的分析检测，还能利用强大的成像功能非常直观地对EVs进行分析，在检测EVs的应用上具有的优势。

这篇发表在J Extracell Vesicles（IF: 15.5）的高分文章，运用诸多实验案例，向我们生动展示了使用Amnis^®成像流式细胞仪检测细胞外囊泡的独特优势。

实验者使用5激光配置的Cytek^® Amnis^® ImageStream^®X Mk II成像流式细胞仪，并使用60x物镜，检测24nm的带荧光的PS微球，从图1底部的图像中可清晰看出，Amnis^®成像流式细胞仪可以检测低至24nm的带荧光的PS微球。

图1：Amnis^®成像流式细胞仪

可检测低至24nm的带荧光的PS微球

对THP-1细胞进行基因改造，使其表达CD63eGFP（CD63是外泌体的表面标记物之一），因此经改造的THP-1细胞分泌的EVs，也会表达CD63eGFP。使用Amnis^®成像流式细胞仪和其他品牌的流式细胞仪对该CD63eGFP+EVs进行检测，从图2中可看出：其他品牌的流式细胞仪虽可检出EVs，但EVs和背景噪音无法区分开，而Amnis^®系统能够将EVs与背景噪音进行明显的区分，使EVs的检测更加直观和轻松，并能极大程度地增大EVs的检出比例。

图2：Amnis^®成像流式细胞仪

可明显区分EVs与背景噪音

由于EVs的尺寸较小，在使用流式细胞术对其进行分析时，利用散射光参数难以有效区分多个EVs同时存在的情况。因此，通常EVs检测实验都需要在低速和低浓度情况下进行，这无疑增大了操作的工作量并降低了检测效率。而使用Amnis^®成像流式细胞仪进行检测时，得益于其强大的成像功能，可轻松识别单个EV，系统能够拍摄EVs的图片，并通过直观信息判断信号是否为单个颗粒（如图3），这种方法不仅能有效排除多个EVs的干扰数据，让检测的结果更加准确可信，还可对多个EVs的出现频率进行定量的统计分析。

图3：使用Amnis^®成像流式细胞仪可通过成像功能，

直观判断EV是否为单个颗粒

富集EVs一般会有较多的步骤，包括多次离心和过滤等，以富集和纯化EV。如图4所示，使用Amnis^®成像流式系统，可以快速上机检测每个步骤处理后的样本情况，通过获取的EVs图像，可清晰直观地获取EVs的完整性，是否发生聚集等信息。此外，Amnis^®系统还可直接计算出EVs的浓度，可检测每个步骤处理后EV的得率等。Amnis^®成像流式系统可极大助力优化富集EVs的操作步骤，真正实现“眼见为实，心中有数”。

图4：Amnis^®成像流式细胞仪

对EVs分离方案的监测和评估

Amnis^®成像流式细胞仪的强大的硬件和软件设计，使其在EVs的检测上具有极高的灵敏度和极低的检测限，并且由于成像功能的加持，可以利用图像，直观判断EVs的数量、形态、聚集状态等，极大地提升了EVs检测的准确率和效率。Amnis^®成像流式细胞仪是检测EVs的不可或缺的实验利器，助您轻轻松松“拿下”EVs检测。