双剑合璧，助力创新--全光谱流式与成像流式技术强强联手，为创新研究奉上强大助力

Cytek^®Aurora™全光谱流式细胞仪以高灵敏度，高维分析等特点而著称，而Cytek Amnis^®成像流式细胞仪则可对细胞进行高分辨率多色成像和定量统计，两者皆为当下最具热度的前沿流式技术。那么，这两种技术的结合和碰撞又将如何为创新发现注入新的活力呢？下面，通过三篇高分文献的精彩案例，我们来一同领略Aurora全光谱流式系统与Amnis成像流式系统联合应用所呈现的非凡魅力。 

在这篇发表在Nature Communication（IF:14.7）的文章中，开发了一种针对系统性红斑狼疮性肾炎(SLE)的抗原特异性调节性T细胞（Sm-Tregs）疗法。该研究证实抗原特异性Tregs可精准调控自身免疫反应，为SLE的靶向治疗提供了新策略。

在实验上游，使用Amnis成像流式系统对免疫突触进行检测和统计，选择TCR1开展后续实验，这为下游实验的开展提供重要指示。而在下游实验中，Aurora全光谱流式系统则用于检测转导Sm-TCR1的Treg的表型稳定性以及其抑制性。成像流式系统和全光谱流式系统各自在研究的上下游开展关键实验，紧密配合，共同发挥重要检测作用。

分别转导了3种SmB/B'58-72特异性的TCR（TCR1、TCR2、TCR3）的Jurkat细胞与HLA-DR15⁺ B-LCLs共培养，使用Amnis®成像流式系统检测发现：当SmB/B'58-72肽段存在时，形成的免疫突触处的CD3及Actin的表达水平均显著高于无肽段存在时（图1）。这表明，在SmB/B'58-72自身抗原存在时，SmB/B'58-72特异性TCR形成免疫突触的能力增强，从而可能引发更强的T细胞活化。

进一步分析发现，TCR1对SmB/B'58-72-HLA-DR15复合物表现出最高的亲和力，因此选择TCR1作为候选受体，进一步进行研究分析。

图1：Amnis成像流式系统检测并定量统计形成的免疫突触

在这篇发表在Chemical Engineering Journal（IF：13.3）的文章中，制备了由超顺磁性氧化铁纳米颗粒（SPIONs）与SARS-CoV-2病毒受体结合域（RBD）组成的仿生病毒样颗粒（VLPs），并使用各种表征方法验证和评估其生物活性。进一步将其开发为一种诊断工具，用于检测特异性抗SARS-CoV-2的抗体。

对于Aurora全光谱流式系统检测所获得的结果，进一步使用Amnis系统中的成像功能进行视觉验证，达到相互印证的效果。此外，两套系统也从不同的维度表征细胞，使结果更加多维和丰富。

使用Aurora全光谱流式细胞仪检测VLPs与细胞的结合情况，1）对于HEK-ACE2细胞（过表达ACE2的293T细胞）：99.61%的细胞同时呈ACE2受体与VLPs双阳性（图4C），进一步验证ACE2是病毒黏附的主要靶点；2）对于HEK-TLR4细胞（过表达TLR4的293T细胞）：84.84%的细胞为TLR4和VLPs的双阳性，表明VLPs对该受体具有强亲和力（图4D）；3）对于HEK-CTRL细胞（未过表达任何受体的293 T细胞），ACE2/VLP双阳性细胞占比8.80%（图4A），TLR4/VLP双阳性细胞占比46.77%（图4B），而且超过90%的HEK-CTRL细胞检测到RBD信号，研究者认为，这可能是因为HEK-CTRL细胞中有表达ACE2和TLR4受体，但也不排除非特异性的作用以及RBD未知靶点的参与。

图4：Aurora全光谱流式细胞仪分析VLP与细胞的结合情况。(A)VLP与HEK-CTRL的ACE2受体结合情况；（B）VLP与HEK-CTRL的TLR4结合情况；（C）VLP与过表达ACE2的HEK-ACE2的结合情况；（D）VLP与过表达HEK-TLR4细胞的结合情况。

针对上述实验结果，利用Amnis成像流式细胞仪进一步去检测和验证病毒样颗粒（VLPs）的仿生特性。成像流式结果显示，VLPs主要特异性结合RBD的靶受体ACE2和TLR4。而且VLPs在HEK-CTRL细胞表面存在部分结合，但与ACE2及TLR4信号无明显共定位，这与全光谱流式细胞术中观察到的非特异性或脱靶结合现象一致。

图5：Amnis成像流式系统分析VLP与细胞的结合。(A)VLP与HEK-CTRL的ACE2受体结合情况；（B）VLP与HEK-CTRL的TLR4结合情况；（C）VLP与过表达ACE2的HEK-ACE2的结合情况；（D）VLP与过表达HEK-TLR4细胞的结合情况。

在这篇发表在Allergy (IF:12.6)的文章中发现人类不同免疫细胞亚群具有独特的IL-4R表面与胞内分布模式，所以靶向治疗（例如治疗哮喘的药物dupilumab）的影响存在差异。而胞内IL-4Rα池可能作为"储备库"，在特定条件下参与疾病复发或耐药机制，为优化治疗策略提供新靶点。

Aurora全光谱流式系统充分发挥其在超多色检测上的强大优势，而Amnis成像流式系统则利用其强大的成像能力清晰直观地呈现出了IL-4Rα在中性粒细胞内的表达情况。两个系统各自发挥其显著优势，共同成就一篇高水平文章。

使用Aurora全光谱流式系统分析了28种人类免疫细胞亚群（图6）中IL-4R亚基（IL-4Rα、γ链、IL-13Rα1）的蛋白表达水平，发现IL-13Rα1仅表达在髓系细胞和B细胞上，而IL-4Rα和γc在所有免疫细胞中均有表达。

图6：Aurora全光谱流式检测人的28种免疫细胞

使用Amnis系统直观检测人中性粒细胞上CD16的表达，以及细胞总体（胞外+胞内）IL-4Rα表达情况。从图像分析以及定量统计结果可看出，中性粒细胞中86%的IL-4Rα表达在细胞内（如图7）。

图7：Amnis成像流式系统检测人中性粒细胞

充分发挥各自优势，可从不同角度提供更多维、更丰富和更全面的信息；

眼见为实，结果更可信，例如可对有争议的细胞群体进行视觉验证；

完全创新的发现，助力新颖的应用以及高水平文章的发表。