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336 人阅读发布时间:2025-09-04 15:27
讲座亮点
流式细胞分选技术作为癌症研究、再生医学等诸多前沿领域的关键上游技术,发挥着不可替代的核心作用。当面对大颗粒或脆弱细胞样品时,需要采用大孔径喷嘴进行低鞘液压力分选,此时对于整个分选设备提出了极高的挑战,液滴形成不均、设备调试时间延长、整体分选效率下降等问题可能接踵而至。
位于瑞士洛桑的世界研究型大学 -- 洛桑联邦理工学院(简称EPFL,图1),其流式中心目前拥有2台5激光配置增强小颗粒检测模块的Cytek® Aurora™全光谱流式分析仪与1台5激光Cytek® Aurora™ CS全光谱流式分选仪。流式中心负责人Miguel Garcia基于Cytek® Aurora™ CS全光谱流式分选仪,对于脆弱样品低压力分选条件进行了摸索优化,获得了高纯度、高活性的卓越分选结果,并成功应用于下游功能性类器官培养实验。

图1 – EPFL是坐落于瑞士洛桑的全球研究型大学
为什么选择Cytek® Aurora™ CS
全光谱流式分选仪?
流式中心计划引入代表新技术潮流的流式设备,以实现传统流式分选仪的迭代升级。通过搭载配置满足多元场景应用需求,兼具灵活易用功能以实现新旧设备交替的完美过渡。(图2)

图2 – 选择Cytek® Aurora™ CS全光谱流式分选仪的原因
采用130 μm喷嘴进行分选的原因
流式中心面向不同领域的应用,涵盖神经生物学、生物工程学、肿瘤免疫、环境生物学等,用户需要分选脆弱细胞及大颗粒样品,包括脆弱干细胞、类器官、包含细菌微菌落的凝胶珠等等。(图3)

图3 – 使用130 μm喷嘴分选的样品示例
脆弱样品的分选实验
样品1:来自患者的前列腺肿瘤活检样本
目的:分选上皮基底(Basal)、腔(Luminal)、基质(Stromal)细胞
传统流式分选难点:1)由于130 μm喷嘴调试时间长,传统流式同一天难以执行其他型号喷嘴的分选实验;2)数据分辨率不佳(受自发荧光干扰); 3)分选纯度不佳;4)分选活性差(腔细胞和基质细胞无法存活,基底细胞生长很慢)。(图4)

图4 – 传统流式分选难点与挑战
全光谱流式分选仪让问题迎刃而解:1)采用130 μm喷嘴预优化设置,从开机到分选条件设置完成时间可缩短近一半;2)多重自发荧光识别与一键“降噪”;3)广泛兼容荧光染料;4)标配130 μm喷嘴,鞘液压力灵活增减;5)支持6路分选。(图5)

图5 – 全光谱流式分选仪从容应对难题,化繁为简
全光谱流式分选结果:所有细胞群分选活性、纯度都很好,体外培养均成功增殖,细胞状态恢复的速度比传统流式更快。而当鞘液压力从8.5 psi降低至6 psi时,细胞增殖并生成类器官的速度还能进一步加快。(图6)

图6 – 前列腺肿瘤活检样本分选结果
样品2:解离的肠道类器官
采用上述优化好的分选条件,对于经过解离的肠道类器官进行分选,分选细胞活性维持很好,而且能够重新生成类器官。其中,P12新亚群在传统流式中被淹没于背景噪音中,借助全光谱流式自发荧光提取功能一键“降噪”之后,成功地从背景中“脱颖而出”。(图7)

图7 – 肠道类器官细胞分选结果
样品3:包含细菌微菌落的凝胶珠
除脆弱细胞分选外,针对包含大肠杆菌微菌落的凝胶珠(~50-70 μm),研究人员同样选择130 μm喷嘴进行分选操作,主要原因是凝胶珠相对脆弱,无法承受较高的压力。通过前侧向散射光强度差异识别并分选出内含不同细菌量的凝胶珠。(图8)

图8 - 包含细菌微菌落的凝胶珠分选
“Super happy with the instrument!”
最后,讲者分享了自己使用Cytek® Aurora™ CS全光谱流式分选仪的切身体会,他认为仪器配置的分选软件灵活易用,能够简明快速地完成分选设置,同一天能够同时满足130 μm及其他型号喷嘴的分选实验,支持6路分选且获得卓越分选结果,还可以无缝衔接Cytek® Aurora™全光谱流式分析仪,实现全场景分选应用,是当之无愧的“Game changer!”(图9)

图9 - Aurora™ CS全光谱流式分选仪的使用反馈
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