免疫衰老指标突破性发现，Cytek®全光谱流式分选仪交叉平台“探秘之旅”

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文章亮点

结果赏析

基于scRNA-seq数据分析结果，研究人员发现CD8⁺和CD4⁺初始T细胞中SOX4⁺亚群显著性表达CD38（图2B, C），已知人类单阳性胸腺细胞高表达CD38，对比初始T细胞流式图发现，初始T细胞中存在一群同样高表达CD38的亚群（图2D）。为了证明这一群细胞为RTEs，采用Cytek® Aurora™ CS全光谱分选型流式细胞仪分别分选了CD38^-/+/++3群初始T细胞，并对接RNA测序平台，结果证实了CD38⁺⁺初始T细胞即为SOX4⁺ RTEs（图2E, F, G）。此外，分选细胞检测了TREC（TCR excision circle）水平，TREC是T细胞发育过程中，T细胞受体基因重排所产生的一种特殊的DNA环形结构，可以作为RTEs的标志物，结果发现CD38⁺⁺初始T细胞高度富集TREC（图2H）。同时，CD38⁺⁺初始T细胞表达HELIOS (IKZF2) and TOX蛋白（图2I），与上述测序结果相符。全光谱流式细胞仪与测序平台相互对接、交叉验证，充分证明了SOX4⁺ RTEs的特征性标志为表面CD38的高表达。

图2 – 鉴定人类RTEs细胞强表达CD38

为了深入探究初始T细胞随年龄增长发生的适应性重塑，研究人员招募了158名跨年龄段的健康人群，分成5组（25–34, 35–44, 45–54, 55–64, >64岁），基于Cytek Aurora全光谱分析型流式细胞仪设计了35色方案（包括活性染料），对于初始T细胞的免疫衰老进行全景式精准监测（图3A）。伴随着年龄增长，CD8⁺初始T细胞比例减少，CD4⁺初始T细胞不变（图3B）。CD8⁺和CD4⁺初始T细胞中CD38⁺⁺RTE均显著性减少，与之相反，二者CXCR3^hi成熟细胞增多，这是迄今为止首次发现CXCR3^hi CD4⁺初始T细胞随年龄增长而增加。除此之外，CD4⁺T细胞中还观察到CD25^lo亚群增多（图3E, F）。

图3 – 35色全光谱流式方案评估年龄相关的初始T细胞重塑

图4 – 35色全光谱流式方案具体信息

研究人员分别分选了<35岁年轻组与>64岁高龄组的供者CD8⁺与CD4⁺初始T细胞，刺激后检测胞内因子表达。高龄组初始T细胞IL-8表达下降，CD8⁺初始T细胞TNF-α、IL-2、IFN-γ表达上调，TNF-β表达不变；CD4⁺初始T细胞TNF-α、IL-2表达上调，而IFN-γ与TNF-β维持不变，说明高龄组与年轻组的初始T细胞功能性存在显著性差异（图5A, B, C）。进一步，研究人员在<35岁的年轻组中，分别分选了CD38高表达（RTEs）与低表达（成熟细胞）两群细胞，刺激后评估胞内因子表达，二者同样观察到功能性差异（图5D, E）。全光谱分选与分析平台对接联用，说明初始T细胞随着年龄增长发生功能性差异，其中有部分改变与RTEs与成熟初始T细胞存在功能性差异有关联。

图5 – 不同年龄组的初始T细胞功能性评估

总结展望

参考文献