Cytek VP Maria C. Jaimes对话Biocompare：解锁全光谱流式荧光染料筛选的 “金手指”

0 人阅读发布时间：2026-10-09 21:25

全光谱流式细胞术相较于传统流式细胞术的一大优势，在于它为荧光染料的选择提供了更大的灵活性。合理搭配荧光染料组合，对获得准确可靠的实验结果至关重要。Biocompare平台梳理了适配全光谱流式细胞仪的荧光染料筛选攻略，并探讨了试剂选择如何影响数据分辨率。来自Cytek Biosciences公司的副总裁、全光谱流式领域的资深专家Maria C. Jaimes在本文中分享了关于荧光染料选择的极具参考价值的专业见解。

全光谱流式细胞术让方案搭配更从容

传统流式与全光谱流式的核心差异，在于荧光信号的采集方式。Cytek Biosciences科学商业部副总裁Maria C. Jaimes表示：“传统流式细胞仪仅能采集荧光染料发射光谱的某一波段。这限制了荧光染料的选择，只能选用发射峰值波长与系统中所配置的光学滤光片相匹配的荧光染料。而全光谱流式细胞仪搭载连续排列的检测器阵列，能够完整捕获荧光染料发射光的完整光谱信号，再通过光谱解析算法，依据各荧光染料的光谱特征将其区分开来。因此，全光谱流式细胞仪支持科研人员选用所有可被仪器机载激光器激发的荧光染料，极大地拓宽了试剂选择的灵活空间。”

图1 – 传统流式与全光谱流式采集荧光信号方式的差异

荧光染料选择核心考量因素

在为全光谱流式细胞仪挑选荧光染料时，需综合考量多项关键要素。

1.仪器硬件配置

不同品牌光谱流式细胞仪硬件配置存在差异，激光器数量、波长、功率、检测器阵列布局、检测器类型（APD/PMT）、光学滤光片等一众因素，均会影响每种荧光染料的实测亮度、特征光谱形状、与其他荧光染料的光谱重叠情况，以及在方案中产生的荧光溢漏扩散程度。荧光染料的表现可能因仪器不同而存在显著差异。

2.样本生物学特征

流式细胞术的核心目标是精准区分不同生物学样本的细胞亚群与细胞功能状态。科研人员至少需要掌握待测标志物的预期表达水平（高、中或低）、表达模式（谱系标志物、分化/成熟标志物或功能性标志物）以及共表达关系。方案配色时，建议将亮度高的荧光染料与低表达标志物搭配，反之亦然。与此同时，需为方案组合中最关键的标志物分配受荧光溢漏扩散影响最低的荧光染料。

3.荧光染料性能特征

除了亮度和扩散之外，其他需要考虑的荧光染料性能特征还包括：稳定性、分子大小和光谱独特性。

在规划纵向研究时，稳定性尤为关键；
在进行胞内染色时，分子大小则是一个重要考量因素。诸如AlexaFluor^® 647 或 Pacific Blue™之类的小分子荧光染料，在胞内染色实验中背景信号与非特异性结合水平通常极低，因为多余的荧光染料可以通过洗涤和离心步骤轻松去除。
Maria C. Jaimes表示：“为评估光谱独特性，通常使用相似度指标。在全光谱流式细胞术中，该指标范围为0到1，其中0代表两种荧光染料的发射光谱截然不同，1代表它们光谱形状完全相同。若评估整个荧光染料方案时，条件数是具有参考价值的综合评估指标。条件数能够反映依据各类荧光染料的发射图谱完成光谱解析的难易程度。”