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公司新闻/正文
CGT中精准绝对计数和活性检测的利器-Guava®毛细管式流式细胞仪
351 人阅读发布时间：2024-12-17 10:46
在细胞和基因治疗（cell and gene therapy, CGT）的工作流程中，细胞会被分离、分化或转化、培养和扩增，随后制备为相应的剂量，而细胞计数和活性分析是这些步骤中不可或缺的检测。但诸多因素也让细胞治疗中的细胞计数变得格外具有挑战性，例如在不同步骤中只有少量珍贵细胞可供使用，会用到多种不同类型的细胞，而且经常会涉及不同细胞的混合样本等。
毛细管式的流式细胞仪Cytek® Guava® Muse®和Cytek® Guava® easyCyte™不仅可以对混合细胞群体中的特定细胞群进行精准绝对计数，还可对细胞进行多维健康分析，免疫表型分析，信号通路研究等多种分析，是CGT研究中不可或缺的利器。
图1. 细胞和基因治疗研究中CAR-T细胞生产流程示例。
Cytek® Guava® Muse®和Cytek® Guava® easyCyte™
可在制备过程的任何步骤中对细胞数量和活性进行精准的检测和质控。
Cytek® Guava® Muse®和Cytek® Guava®
easyCyte™流式细胞仪用于CGT的优势：
· 毛细管式流式细胞仪可实现无beads精准绝对计数
· 可对混合细胞群体中的特定细胞群进行计数和表征
· 相比于其他计数方法，具有卓越的精准度和可重复性
· 无鞘液，少废液
· 样本上样量少，节省珍贵样本且节约时间
· 可提供优化好方案的配套试剂盒
实验方法
利用Muse® Count & Viability Assay 和 Guava® ViaCount™试剂盒，在Cytek® Guava® Muse®和Cytek® Guava® easyCyte™流式细胞仪上，如图2所示，仅需简单的步骤，即可对细胞进行准确的计数和精准的活性分析。
图2：使用Muse® Count & Viability Assay 和 Guava® ViaCount™试剂盒
在Cytek® Guava® Muse®或Guava® easyCyte™流式细胞仪上
开展实验的流程
展示结果
高度可重复性
分别将PBMC样本和CD3 T细胞样本稀释为三个浓度（浓度范围：1-10M cells/mL），每个浓度准备10个重复样本，使用Cytek® Guava® Muse®和Cytek® Guava® easyCyte™流式细胞仪对这些样本进行检测，计算出平均浓度，活性以及%CV。从表1和表2中可以看出，在两种流式细胞仪上测得浓度和活性的%CV均小于10%，证明Cytek® Guava® Muse®和Guava® easyCyte™两个系统在检测不同细胞的浓度和活性时，均有较高的可重复性。
表1：使用Guava® ViaCount™ 试剂盒在Cytek® Guava® easyCyte™ HT系统上对PBMC和CD3 T细胞进行检测。
表2：使用Guava® Count & Viability试剂盒在Cytek® Guava® Muse®系统上对PBMC和CD3 T细胞进行检测。
仪器间检测结果高度一致
将PBMC样本制备为多种不同的浓度，每个浓度准备6个重复样本。使用Guava® ViaCount™试剂，并用4台不同的Cytek® Guava® easyCyte™流式细胞仪，对这些细胞样本分别进行检测。如表3所示，无论是对于细胞的浓度还是活性的检测，仪器之间的%CV均小于10%，展现了不同的Guava® easyCyte™流式细胞仪之间检测数据的高度一致性。
表3：使用Guava® ViaCount™ 试剂在不同的Cytek® Guava® easyCyte™ HT仪器上检测PBMC细胞的浓度和活性。
与其他计数方法的比较
为了评估毛细管式流式细胞仪在绝对计数准确性上的表现，将三种不同的悬浮细胞系Jurkat、 HB以及K562细胞制备成不同的浓度，分别在Guava® Muse®流式细胞仪、基于成像的自动细胞计数仪以及手动血球计数仪上进行检测和计数。如图3中的线性回归统计分析所示，Guava® Muse® 细胞分析仪检测得到的数据与理论细胞浓度关联性最好，其斜率非常接近 1，证明 Guava® Muse® 比其他两种计数方案结果更为精确。
图5：比较Guava® Muse®流式细胞仪、基于成像的自动细胞计数仪以及手动血球计数仪上的计数表现。每个点代表三次重复实验的均值。
结论
在细胞和基因治疗的研究、生产和生产流程中，检测细胞浓度和活性是极其关键的步骤。上述研究中使用Cytek® Guava® Muse®和Cytek® Guava®easyCyte™流式细胞仪对多种细胞系进行绝对计数和活性的检测，均展示了精准且可重复的数据结果，因此Guava®毛细管式流式细胞仪搭配细胞计数和活性检测试剂盒可为细胞和基因治疗的研究提供强大有力的支持。
参考文献：
1.Weber EW, Maus MV, Mackall CL. The Emerging Landscape of Immune Cell Therapies. Cell. 2020 Apr 2;181(1):46-62.
2.Abou-El-Enein M, Elsallab M, Feldman SA, et al. Scalable Manufacturing of CAR T cells for Cancer Immunotherapy. Blood Cancer Discov. 2021 Sep;2(5):408-422.
3.Panebianco C, Trivieri N, Villani A, et al. Improving Gemcitabine Sensitivity in Pancreatic Cancer Cells by Restoring miRNA-217 Levels. Biomolecules. 2021 Apr 26;11(5):639.
4.Feng X, Han H, Zou D, et al. Suberoylanilide hydroxamic acid-induced specific epigenetic regulation controls Leptin-induced proliferation of breast cancer cell lines. Oncotarget. 2017 Jan 10;8(2):3364-3379.
5.Nakashima H, Ivanov P, Anderson PJ, et al. Tumor Interferon Signaling Is Regulated by a lncRNA INCR1 Transcribed from the PD-L1 Locus. Mol Cell. 2020 Jun 18;78(6):1207-122.
6.The Muse® Cell Count & Viability Assay Provides Improved Accuracy and Precision for Cell Counting and Viability Measurements Across Multiple Cell Lines. Luminex Corporation.
关于Cytek
About Cytek /
Cytek Biosciences, Inc.（Nasdaq: CTKB）作为一家全球技术先的生命科学技术公司，通过其受专利保护的全光谱分析（Full Spectrum Profiling™，FSP™）技术，提供高分辨率、高参数和高灵敏度的新一代细胞分析工具。Cytek的创新技术通过检测荧光信号的完整光谱信息，以实现更高水平更高灵敏度的多参数检测。Cytek的FSP™平台包括其核心仪器 ——Aurora™和Northern Lights™分析系统、Aurora™ CS分选系统，Amnis®和Guava®品牌下的流式细胞仪和成像产品，Cytek Orion™全自动试剂预混系统，增强小颗粒（ESP™）检测技术，以及试剂、软件和服务，为客户提供全面和完整的解决方案。Cytek总部位于美国加利福尼亚州Fremont，在全球设有分部和分销渠道。更多的相关信息，请登录Cytek的官方网站：www.cytekbio.com和www.cytekbio.com.cn。
注：Cytek的产品仅供科研使用，不可用于临床诊断（Cytek® Northern Lights-CLC系统，DxP Athena®系统以及部分试剂除外）。
Cytek, SpectroPanel, Tonbo Biosciences, cFluor, SpectroFlo, ESP, Full Spectrum Profiling, FSP, DxP Athena, Cytek Aurora, Northern Lights, Cytek Orion, Amnis, Guava 和 ImageStream 是Cytek Biosciences, Inc.的商标。
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