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开启崭新视野,释放无限潜能,分析分选极光二重奏谱写科研新篇章

155 人阅读发布时间:2025-12-11 19:44

爱荷华大学(University of Iowa)是美国公立研究型大学,是爱荷华州立大学系统的旗舰校,享有“公立常青藤”的美誉。爱荷华大学在医学、基因、水力学、语言听力等多个专科方向世界闻名,同时在农业医药、生物分析、生物工程、生物医学,药理学等领域都有重要的创新。

 

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爱荷华大学目前共拥有7台Cytek® Aurora™全光谱流式系统,其卡佛医学院流式中心配备有2台5激光Cytek® Aurora™全光谱分析型流式细胞仪,以及1台5激光Cytek® Aurora™ CS全光谱分选型流式细胞仪。在2024年11月,流式中心也迎来了新成员——Cytek® Amnis® ImageStream®X Mk II 成像流式细胞仪,标志着该中心同时集齐了光谱流式圈与成像流式圈的两大“顶流”。流式中心目前拥有的流式仪器情况如图1所示。(图1)

 

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图1 – 爱荷华大学流式中心的流式仪器

 

近期,来自爱荷华大学流式中心主管Heath Vignes,为我们带来了一场精彩的讲座:Bridging The Gap: Maximizing The Potential Of Full Spectrum Cell Analyzers And Sorters,生动讲述了流式中心为何从传统流式跨越到全光谱流式细胞术,以及这一技术迭代为科研探索带来的充满惊喜的绚烂旅程。

Heath Vignesz主管首先介绍了流式中心的基本情况和主要仪器使用情况,从图2仪器使用时长统计结果可以看出,Aurora 1全光谱流式分析仪(装机于2019年,图中橙色标识)和Aurora 2全光谱流式分析仪(装机于2020年,图中深灰色标识)使用机时逐年递增,相较之下,传统流式的使用频率则逐年下降,这与使用者方案颜色数量需求增多,以及对于软件易用性灵活性要求更高等都有关系。Aurora CS全光谱流式分选仪装机于2023年(图中淡灰色标识),装机不久,就迅速成为了承担分选实验的“主力军”。(图2)

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图2 - 中心流式仪器使用时长统计

 

为什么选择Cytek全光谱流式细胞仪呢?Heath Vignes主管指出了以下3个主要原因:

 

1 颜色数量

2019年之前,中心只有一台4激光的传统流式可用于多色实验,但其也仅仅搭载12个荧光通道,高维方案往往只能分管完成。而引入全光谱流式细胞仪之后,多管少色的实验直接合为一管超多色,也避免了批次间的差异影响结果判读。

 

2 分辨率

Cytek创新型全光谱分析检测模块带来超高的灵敏度,APD检测器带来分辨率质的飞跃。

 

3 多功能性

兼容全光谱与传统模式一键切换,特色的自发荧光提取功能能够轻松应对“Dirty”的样本,让高自发荧光样本的数据也能“高清”呈现。(图3)

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图3 – 选择全光谱流式的主要因素

 

接下来Heath分享了使用Cytek全光谱流式细胞仪开展的研究。OMIP-099是基于Cytek Aurora全光谱流式分析发表的31色人外周血T细胞精细免疫分型方案,二维散点图与降维可视化数据分群结果展现了非常出色的分辨率。荧光溢漏扩散矩阵(Spillover Spreading Matrix)整体直观呈现出,31色荧光组合之间溢漏扩散很小,说明了不管是方案设计、仪器光学性能和设置都达到了极好的状态。(图4)

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图4 - OMIP-099 31色人外周血T细胞精细免疫分型方案

 

这是一个比较有趣的实验,通过蓝激光和紫激光下的SSC,免标记抗体直接将人的外周血样本中红细胞与白细胞区分开,排除了非特异性结合的红细胞对于CD14单核细胞的检测干扰,需要指出的是,这两个SSC均是仪器标配。(图5)

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图5 – 蓝/紫激光SSC巧妙区分红细胞与白细胞

 

这是另一个充分体现全光谱流式细胞仪独特优势的实验,面对小鼠大脑组织这一类高度异质性的样本,传统流式往往一筹莫展,还可能会像图6上方的结果一样出现假阳性结果。虽然这个样本是GFP阴性管,但是由于自发荧光的干扰,出现了橙色箭头所指区域的假阳性群体,带来了结果的误判。而在提取自发荧光之后,这个问题就会迎刃而解,错误群体“一键归零”,数据分辨率也获得显著性提升。(图6)

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图6 – 全光谱流式特色的自发荧光提取功能

 

Cytek全光谱流式分析仪和分选仪能够实现方案“丝滑”平移,小鼠脾脏样本在分析仪上优化好分群结果后,直接“复制—粘贴”到分选仪上,就可以获得重现性结果并快速分选到目的细胞群体,大大节省了操作流程。分选完进行回测,纯度高达98.99%,充分证明了全光谱流式分选仪的出色性能,也生动诠释了全光谱流式极光二重奏联动所释放的无限魅力。极光二重奏,让科研探索释放无限可能性。(图7)

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 图7 - 全光谱流式分析仪和分选仪方案一键式平移

 

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