- 移动端
Cytek Biosciences品牌商
6 年
手机商铺
- NaN
- 0
- 1
- 2
- 1
推荐产品
公司新闻/正文
46色小鼠胞内方案，打开肿瘤免疫微环境全局性视野
401 人阅读发布时间：2025-09-04 14:26
46色小鼠方案，重塑全局视野
恶性外周神经鞘瘤是一种极具侵袭性的外周神经系统肿瘤，对于绝大多数传统肿瘤疗法存在耐药性，研究人员一直致力于发掘新型的治疗策略。临床前研究表明，鲁索替尼（RUX，FDA批准的JAK蛋白激酶抑制剂）增强了溶瘤病毒（oHSV）在小鼠肉瘤模型中的疗效，能够观察到肿瘤免疫微环境发生改变。然而，由于肿瘤浸润的免疫细胞含量少，加之传统流式细胞仪检测参数受限，之前的研究无法在珍贵样本中纵向深入聚焦到感兴趣的亚群，所得结论容易陷入“盲人摸象”的认知误区。Cytek®全光谱流式细胞仪的问世，让多管少色合并为一管超多色的梦想照进现实，为肿瘤免疫微环境探索开辟了全局性的视野。美国俄亥俄州哥伦布市全国儿童医院的研究人员基于Cytek Aurora™全光谱分析型流式细胞仪设计了1管46色小鼠淋系和髓系胞内外方案，揭示了RUX和oHSV联合治疗小鼠后，肿瘤免疫微环境中生发中心B细胞活化能力增强，分泌细胞因子的CD4+ T细胞亚群丰度增加（见图1）。
图1 – 46色方案全局性表征小鼠肿瘤免疫微环境变化1
46色全光谱流式方案详细信息
为了全景式监测小鼠在RUX和oHSV联合治疗后肿瘤免疫微环境的动态变化，包括表征淋系和髓系细胞亚群表型与胞内细胞因子、转录因子的功能性改变，研究人员分别取样小鼠肿瘤、淋巴结、脾脏、外周血、以及骨髓进行评估（见图2）。这个46色方案还可延伸应用到小鼠其他肿瘤类型与疾病模型的评估。
图2 – 全光谱流式细胞仪46色方案与制样流程
小鼠模型实验方案与流式门控策略
3-4周龄小鼠注射肿瘤细胞并成瘤后，于oHSV处理前3天（-3至-1天），连续每天进行RUX/PBS的单次接种，随后分别在第0天与第7天采用oHSV/PBS处理小鼠，第11天取小鼠肿瘤和组织处理成单细胞悬液（见图3B），使用Cytek Aurora全光谱流式细胞仪进行数据采集。门控策略如下所示（见图3A）：
1 圈选活的免疫细胞
排除细胞碎片与黏连体，从单细胞图中找到Zombie NIR-CD45+免疫细胞；
2 B细胞
CD3-CD19+B细胞细分出Bregs以及效应细胞亚群，例如过渡性、边缘区（MZ）、滤泡（FOL）、生发中心（GC）、浆母（PBs）细胞、B1细胞，并对B细胞活化指标CD80、CD86、MHC-II、CD69进行检测；
3 CD19-细胞
区分NK、T、NKT细胞；
4 T细胞
基于CD4+T细胞分出CD25+FOXP3+的Tregs，并分别评估CD4+和CD8+T细胞表面标志物Ly6C、CD44、CD62L、CD49b、CD103、CD25、CD69、PD-1以及胞内细胞因子TNF-a、IFN-g、IL-4、IL-17A、IL-21、GzB表达丰度；
5 髓系细胞
通过CD19-CD3-NK1.1-CD93-CD138-进行识别，并细分出中性粒细胞/粒细胞髓系来源的抑制性细胞（gMDSCs）、嗜酸性粒细胞、DCs、单核细胞/单核细胞MDSCs、巨噬细胞，髓系细胞的活化指标同样基于CD80、CD86、MHC-II、CD69进行评估。
图3 – 小鼠模型实验方案及全光谱流式门控策略
Cytek FSP™文章
参考文献
1Dhital, R. et al. Ruxolitinib and oHSV combination therapy increases CD4 T cell activity and germinal center B cell populations in murine sarcoma. Mol Ther Oncol 33, 200929, doi:10.1016/j.omton.2024.200929 (2025).
2Park, L. M., Lannigan, J. & Jaimes, M. C. OMIP-069: Forty-Color Full Spectrum Flow Cytometry Panel for Deep Immunophenotyping of Major Cell Subsets in Human Peripheral Blood. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology 97, 1044-1051, doi:10.1002/cyto.a.24213 (2020).
3Mueller, Y. M. et al. Stratification of hospitalized COVID-19 patients into clinical severity progression groups by immuno-phenotyping and machine learning. Nat Commun 13, 915, doi:10.1038/s41467-022-28621-0 (2022).
4Wahadat, M. J. et al. Targeted multiomics in childhood-onset SLE reveal distinct biological phenotypes associated with disease activity: results from an explorative study. Lupus science & medicine 10, doi:10.1136/lupus-2022-000799 (2023).
5Park, L. M., Lannigan, J., Low, Q., Jaimes, M. C. & Bonilla, D. L. OMIP-109: 45-color full spectrum flow cytometry panel for deep immunophenotyping of the major lineages present in human peripheral blood mononuclear cells with emphasis on the T cell memory compartment. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology, doi:10.1002/cyto.a.24900 (2024).
6Brandi, J., Wiethe, C., Riehn, M. & Jacobs, T. OMIP-93: A 41-color high parameter panel to characterize various co-inhibitory molecules and their ligands in the lymphoid and myeloid compartment in mice. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology 103, 624-630, doi:10.1002/cyto.a.24740 (2023).
7Kare, A. J. et al. OMIP-095: 40-Color spectral flow cytometry delineates all major leukocyte populations in murine lymphoid tissues. Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology 103, 839-850, doi:10.1002/cyto.a.24788 (2023).
8Asano, T. et al. X-linked recessive TLR7 deficiency in ~1% of men under 60 years old with life-threatening COVID-19. Science immunology 6, doi:10.1126/sciimmunol.abl4348 (2021).