全光谱流式纳米级维度分选——细胞外囊泡精准分选完整解决方案

细胞外囊泡（EVs）属于细胞来源的膜包被纳米级颗粒，被释放到周围的环境中，尽管个头小，在临床诊断、药物递送、免疫治疗、再生医学等研究领域却是发挥着至关重要的作用。EVs粒径小且具有异质性，传统检测手段面临分辨率不足、灵敏度低等技术瓶颈，在精准识别与量化检测方面困难重重¹。近些年来，单囊泡流式细胞术（vFC™）在众多检测平台中逐渐脱颖而出，其能够实现对EVs单颗粒的精准定量检测（图1）^{2, 3, 4}。技术突破而探索不止，越来越多的研究人员也开始利用流式细胞分选仪对特异性EVs亚群进行精准分离，以深入解析其功能特性，并挖掘其在基础研究与临床治疗的应用潜力。

图1 – 单囊泡流式细胞术（vFC™）示例图

研究人员基于5激光Cytek Aurora CS分选仪(搭载ESP检测模块)，采用vCal nanoRainbow 微球（Cellarcus Biosciences）进行性能验证，并使用 vCal nanoCal 微球（Cellarcus Biosciences）和标记vFRed的合成囊泡尺寸标准品（Lipo100）进行仪器校准。软件中一键调取小颗粒检测默认增益（图2A），选择70 μm喷嘴及对应喷嘴优化条件（图2B）。

图2 – Cytek ESP检测模块仪器设置与70 μm喷嘴优化条件

单标对照：vCal nanoCal 微球标记APC或BV421荧光抗体，EVs标记vFRed膜染料；

多标样品：血小板和红细胞来源的细胞外囊泡采用vFRed™ 染色标记膜包被颗粒，然后加入荧光抗体来特异性标记血小板（CD41-BV421）和红细胞来源EVs的表面标志物（CD235a-APC）。

数据采集：对照管与样品管均采用低速获取2 min，控制采集速度以减少冲突事件发生，让双阳性门内细胞比例维持<0.5%（图3）。

遵循MIFlowCyt-EV指南要求，分选设门策略根据对照组（包括缓冲液组，缓冲液+试剂组，EVs+试剂组等）进行设置，从vFRed+门内区分出CD41+血小板来源EVs和CD235a+红细胞来源EVs（图3），采用多路分选模式，分别分选100万个颗粒到含有0.01%牛血清白蛋白的PBS缓冲液中。

图3 - 血小板和红细胞来源的细胞外囊泡分选设门

研究人员利用Cytek Aurora分析仪（与上述分选仪相同配置）对分选样品进行回测，两路分选纯度均高达97%以上。此外，分选报告显示，两路分选效率同样高达97%。采用vFRed染色的Lipo100囊泡尺寸标准品对分选到的EVs进行粒径校准，采用nanoCal 微球对其荧光单位（每个囊泡结合的抗体量，ABV）进行校准（图4）。

图4 – 搭载ESP检测模块的Cytek Aurora分析仪回测分选结果

研究人员采用搭载ESP检测模块的Cytek Aurora CS分选仪，构建了基于表面标志物精准分选细胞外囊泡的全流程解决方案，回测实验充分证明了分选系统的卓越性能，为下游对接功能性实验提供了高质量的样本保障。Cytek Aurora CS 分选仪兼具精准分析与高效分选细胞外囊泡的功能，为纳米级颗粒研究开辟了新维度，加速了临床治疗和诊断开发的步伐。Cytek旗下的Cytek Aurora和 Cytek Northern Lights™ 全光谱流式分析仪、Cytek Aurora CS 全光谱流式分选仪均支持增强小颗粒 (ESP) 检测模块的全新配件，一机同时兼容小颗粒与大细胞的精准量化检测，成为科研人员和临床医生多样化场景实验需求标杆产品。

图5 – Cytek全光谱流式细胞仪在小颗粒领域潜力无限